Folin-酚试剂法测定蛋白质含量和双缩脲法比较,哪个更加灵敏,为什么
来源:学生作业帮助网 编辑:作业帮 时间:2024/07/17 04:36:37
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酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用.浓度较低的尿素(0.5%),硫酸纳(1%),硝酸纳(1%),三氯乙酸(0.5%),乙醇(5%),乙醚(5%),丙酮(0.5%)等
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原理:FOLIN-酚试剂可以和游离的酪蛋白螯合,呈蓝色,可以通过OT检测,判断溶液中的游离酪蛋白含量.注意:注意OT测量对比空白样品中的蛋白含量.
没有特别的要求,这个方法的原理是试剂和蛋白质中酪氨酸、苯丙氨酸残基反应显色,蛋白只要能溶于水形成均匀澄清溶液,不会影响显色,就可以了.
该方法可受这些物质如:硫酸铵;Tris缓冲液;甘氨酸;各种硫醇干扰,另外该方法有耗费时间长;操作要严格计时;颜色深浅随不同蛋白质变化等缺点.
实验原理:采用Folin-酚法测定,Folin-酚试剂由甲试剂和乙试剂组成.甲试剂由碳酸钠,氢氧化钠,硫酸铜及酒石酸钾钠(KNaC4H4O6•4H2O)组成.多肽中的肽键在碱性条件下,与酒
避光没做好、试剂失效
没有特别的要求,这个方法的原理是试剂和蛋白质中酪氨酸、苯丙氨酸残基反应显色,蛋白只要能溶于水形成均匀澄清溶液,不会影响显色,就可以了.
大概与样品中的干扰物质有关.干扰Folin酚法的物质有:酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等.干扰考马斯法的:主要是去污剂,如TritonX-100、十二烷基硫酸钠(SDS)和0
其基本原理应该很清楚了,所以在此就不作说明.需要注意的是,用此方法测蛋白质时,还原反应发生在PH10的溶液中,而Folin试剂在碱性条件下不稳定,所以将Folin试剂加入碱性的铜和蛋白质溶液中必须立即
不能,FOLIN酚法测定是可溶蛋白质,鱼粉蛋白质不溶于水,难以用这种方法测定.可以用凯式定氮法测定.先硝化后测定.
Folin酚法最好,准确度最高;双缩脲法最差,准确度最低;现很少用;考马斯亮蓝G250法介于两者之间.
紫外吸收法是以含有苯环的氨基酸为基础测量的,OD280值,各种蛋白含有的苯环的氨基酸数量不一定,所以只是大致估计.LowryProteinAssayKit福林酚蛋白浓度测定试剂盒\x05产品说明:在碱
加入双缩脲试剂,发生紫色反应证明有蛋白质存在
第一步相当于双缩脲反应,在碱性条件下蛋白质中的肽键与Cu2+作用生成络合物;第二步是基于Folin试剂(磷钼酸和磷钨酸试剂)在碱性条件下极不稳定,易被酚类化合物还原生成钼蓝和钨蓝混合物(呈蓝色反应),
--不做标准曲线你怎么通过吸光度来计算浓度?因为两者反应更灵敏,至于为什么反应更灵敏,问化学牛人.
[编辑本段]1原理蛋白质是含氮的有机化合物.食品与硫酸和催化剂一同加热消化,使蛋白质分解,分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵.然后碱化蒸馏使氨游离,用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定,根据酸的消耗量乘以
优点:是灵敏度高,比双缩脲法灵敏得多;重复性好.颜色深,析光度.缺点:是费时间较长,要精确控制操作时间,标准曲线也不是严格的直线形式,且专一性较差,干扰物质较多.近年来folin-酚法逐渐被考马斯亮兰
Folin—酚试剂法最早是由Lowry确定的测定蛋白质浓度的基本方法.以后在生物化学领域得到广泛的应用.此法的显色原理与双缩脲方法是相同的,只是加入了第二种试剂,即Folin—酚试剂,以增加显色量,从
Folin-酚试剂法测定蛋白质含量是双缩脲法原理,所用的试剂是由两部分组成的.第一部分相当于双缩脲试剂,第二部分为Folin-酚试剂(磷钨酸和磷钼酸混合液).因此,反应的程序也是分两步进行的.第一步相