地高辛标记cRNA探针显色的基本步骤是什么?

来源：学生作业帮编辑：搜搜考试网作业帮分类：生物作业时间：2024/07/29 23:00:14

显色：
　　（1）用缓冲液1冲洗杂交后的载片2×3min.
　　（2）在缓冲液1中10min,室温以封闭非特异性结合部位.
　　（3）拭干切片周围的载片,注意保持切片湿润.加数滴抗地高辛抗血清（工作浓度1：500,以缓冲液1稀释）,孵育2h,室温.
　　（4）缓冲液1漂洗3×3min.
　　（5）浸入缓冲液210min室温.
　　（6）浸入底物中孵育10～30min（或更长时间,视需要而定）,底物内含显色BCIP/NBT,室温.最好用锡箔纸包裹反应盒,使显色在黑暗中进行.定期取出切片在显微镜下检测反应强度.根据反应强度决定延长或终止反应.反应颜色为紫蓝色.
　　（7）将切片浸入缓冲液3以终止反应.
　　（8）复染,可用1%伊红、1%苏木精、1%亮绿或5%的焦宁（又称派咯宁丫）（pyronin 丫）10～30s.
　　（9）流水洗5～10min,直至水无色为止.
　　（10）在切片未干前,以PBS/甘油封固切片,如要永久保存,可以用DPX在盖片四周封固.为去除水份,在封固前可进行梯度酒精脱水,透明,DPX封固,但每步时间仅需几秒钟,时间过长易致褪色.

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