已知一段基因片段,如何克隆之前的片段,也就是如何克隆已知基因的启动子?启动子一般有多少BP?
来源:学生作业帮 编辑:搜搜考试网作业帮 分类:语文作业 时间:2024/08/04 01:35:05
已知一段基因片段,如何克隆之前的片段,也就是如何克隆已知基因的启动子?启动子一般有多少BP?
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不知道你要克隆什么基因的启动子?
一般而言,如果是与模式生物亲缘关系较近的生物中克隆某基因的启动子,可以查询模式生物该基因的sequence viewer相关信息,这个在拟南芥数据库以及NCBI中都可以实现.相关操作内容可以参阅本论坛中关于NCBI使用方法的一些帖子.
查到sequence viewer后,选取该基因5‘UTR上游2000bp的序列作为你的目的序列,然后与你的基因的已知序列(我想,在克隆启动子之前,你应该至少已经有你的目的基因的CDS了吧?)ATG下游序列进行拼接,然后利用你查到的序列设计F引物,利用你已知的目的基因序列设计R引物,再按照常规PCR进行后续试验即可!
对于那些与模式生物亲缘关系较远的生物而言,我建议你在CNKI上输入“启动子克隆”为关键词查一下,你会发现,应该有很多人总结过这方面的技术的!
另外,我这还有几种方法,需要M我
一般而言,如果是与模式生物亲缘关系较近的生物中克隆某基因的启动子,可以查询模式生物该基因的sequence viewer相关信息,这个在拟南芥数据库以及NCBI中都可以实现.相关操作内容可以参阅本论坛中关于NCBI使用方法的一些帖子.
查到sequence viewer后,选取该基因5‘UTR上游2000bp的序列作为你的目的序列,然后与你的基因的已知序列(我想,在克隆启动子之前,你应该至少已经有你的目的基因的CDS了吧?)ATG下游序列进行拼接,然后利用你查到的序列设计F引物,利用你已知的目的基因序列设计R引物,再按照常规PCR进行后续试验即可!
对于那些与模式生物亲缘关系较远的生物而言,我建议你在CNKI上输入“启动子克隆”为关键词查一下,你会发现,应该有很多人总结过这方面的技术的!
另外,我这还有几种方法,需要M我
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双酶切老是切不完全我PCR克隆了一段200bp的基因片段,然后连接到了T载体,引物2端各有EcoRI和HindIII的酶
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