（2013•黄浦区二模）回答下列有关基因工程问题．

来源：学生作业帮编辑：搜搜考试网作业帮分类：生物作业时间：2024/06/30 05:22:38

（2013•黄浦区二模）回答下列有关基因工程问题．
图1表示含有目的基因D的DNA片段长度（bp即碱基对）和部分碱基序列，图2表示一种质粒的结构和部分碱基序列．现有MspI、BamHI、MboI、SmaI 4种限制性核酸内切酶，它们识别的碱基序列和酶切位点分别为C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．

（1）限制性核酸内切酶的酶切点是连接两个核苷酸之间的______．下列有关限制酶的叙述正确的是______．（可多选）
A．从反应类型来看，限制酶催化的是一种水解反应
B．限制酶的活性受温度、pH的影响
C．一种限制酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列
D．限制酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越小
（2）若用限制酶SmaI完全切割图1中DNA片段，其产物长度分别为______．
（3）若图1中虚线方框内的碱基对被T-A碱基对替换，那么基因D就突变为基因d．从杂合子中分离出图1及其对应的DNA片段，用限制酶Sma I完全切割，产物中共有______种不同长度的DNA片段．
（4）若将图2中质粒和目的基因D通过同种限制酶处理后进行连接，形成重组质粒，那么应选用的限制酶是______．在导入重组质粒后，为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，请你设计一个筛选方案：______．

（1）限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂．
A、限制酶催化的水解反应，故A正确；
B、酶的活性受温度、PH等因素的影响，故B正确；
C、限制酶具有专一性，即一种限制酶只能识别双链DNA中某种特定的脱氧核苷酸序列，故C正确；
D、限制酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越大，故D错误．
故选：ABC．
（2）（3）从杂合子体细胞内分离出图1所示的DNA片段及其同源片段，D基因片段有两个限制酶SmaⅠ酶切位点，完全切割后出现三个片段长度分别是537bp、790bp、661bp，发生基因突变后的d基因片段只有一个限制酶SmaⅠ酶切位点，完全切割后出现两个片段长度分别是1327bp、661bp，所以图1所示的DNA片段及其同源片段被切割后共出现四种不同的DNA片段．
（4）在构建重组质粒时，目的基因D不能用限制酶MspⅠ和SmaⅠ，这两种限制酶切割的位点在目的基因的中间，如果切割目的基因D会被破坏；也不能用限制酶MboⅠ，它在目的基因上有两个酶切位点，如果切割质粒上的标记基因会被破坏，就没办法进行重组质粒的检测，故应选用限制酶BamHⅠ；用限制酶BamHⅠ切割质粒会破坏抗生素A抗性基因，保留抗生素B抗性基因，则导入重组质粒的大肠杆菌能再含有抗生素B的培养基上生存，但不能在含有抗生素A的培养基上生存．所以为了筛选出含重组质粒的大肠杆菌，在培养基中分别添加抗生素A、抗生素B，筛选出能在抗生素B中生长而不能再抗生素A中生长的大肠杆菌．
故答案：（1）磷酸二酯键 ABC
（2）537bp、790bp、661bp
（3）4
（4）BamHⅠ在培养基中分别添加抗生素A、抗生素B，筛选出能在抗生素B中生长而不能再抗生素A中生长的大肠杆菌

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