搜搜考试网如何检测一个细胞中的蛋白质表达量?
来源：学生作业帮 编辑：搜搜考试网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/07/10 10:30:21
如何检测一个细胞中的蛋白质表达量?
问题是这样的 我现在有个想法,就是验证杂合子的蛋白表达含量比野生型的少~ 但是具体用什么技术可以做到呢?或者提个思路也行啊~ 谢谢~
问题是这样的 我现在有个想法,就是验证杂合子的蛋白表达含量比野生型的少~ 但是具体用什么技术可以做到呢?或者提个思路也行啊~ 谢谢~
实时荧光定量PCR检测mRNA的表达,然后westernblot检测蛋白表达量.
再问： 您好~ 您现在有时间吗？我想具体请教一下您~因为我现在还是本科低年级学生，所以对这些还不是很懂。我的qq号是1992758183.。。。您能上qq和我具体说下吗？真的很摆脱了~
再答： 没有qq，就这里问吧。首先你确定拿到了这两种细胞系，通过PCR反应证明一个是野生型一个是突变型，即snp。然后用试剂盒提取RNA，设计引物，采用半定量或绝对定量的方法，测定mRNA表达水平；然后另取细胞裂解，提取总蛋白，用特异性抗体检测蛋白表达量。很简单，你问一个研究生就行。
再问： 那这种荧光定量测定的计数花费贵吗？ 因为我的实验经费不是很多~ 还有我想问问您，据您所知，有没有验证过杂合型的细胞比野生型的蛋白表达量少？这个实验可以定量做出来嘛？
再答： 编码区突变很容易造成这种情况，荧光定量PCR需要专门仪器，各个实验室收费不同，你一定有老师的，问问老师，他会有熟人，去测一下也许不花钱
再问： 恩~ 有是有老师~但老师是大忙人 不管我们这些本科生的。。。对了~ 您用过这个实时荧光定量pcr吗？ 是能检测出细胞中的mRNA的水平？？？
再答： 当然，必须用这个方法。
再问： 那实时荧光PCR不是要以mRNA为模板？ realtime pcr 能够以mRNA为模板吗？？？测量蛋白的表达量不能只做westernblot？
再答： real-time PCR功能很多的，可以测溶解曲线，甚至左高分辨率溶解曲线，当然最常用的就是做mRNA表达了，要做定量mRNA表达当然要以mRNA为模板，否则还做个什么。当然，如果你就是想基因分型，那么模板是DNA就可以了。mRNA提取质量是做实验的关键，不要讲解了，realtime定量的基础就是CT值，初始载量不能如实反映试验，那么一定是假阳性或假阴性。做westernblot是非常必要的，但是不要忘记转录后调控，因此做出来mRNA表达升高，但是免疫印迹没变化也别感到奇怪。当然最终起决定作用的还是蛋白表达量，那必须是免疫印迹做的。
再问： 您好~ 您现在有时间吗？我想具体请教一下您~因为我现在还是本科低年级学生，所以对这些还不是很懂。我的qq号是1992758183.。。。您能上qq和我具体说下吗？真的很摆脱了~
再答： 没有qq，就这里问吧。首先你确定拿到了这两种细胞系，通过PCR反应证明一个是野生型一个是突变型，即snp。然后用试剂盒提取RNA，设计引物，采用半定量或绝对定量的方法，测定mRNA表达水平；然后另取细胞裂解，提取总蛋白，用特异性抗体检测蛋白表达量。很简单，你问一个研究生就行。
再问： 那这种荧光定量测定的计数花费贵吗？ 因为我的实验经费不是很多~ 还有我想问问您，据您所知，有没有验证过杂合型的细胞比野生型的蛋白表达量少？这个实验可以定量做出来嘛？
再答： 编码区突变很容易造成这种情况，荧光定量PCR需要专门仪器，各个实验室收费不同，你一定有老师的，问问老师，他会有熟人，去测一下也许不花钱
再问： 恩~ 有是有老师~但老师是大忙人 不管我们这些本科生的。。。对了~ 您用过这个实时荧光定量pcr吗？ 是能检测出细胞中的mRNA的水平？？？
再答： 当然，必须用这个方法。
再问： 那实时荧光PCR不是要以mRNA为模板？ realtime pcr 能够以mRNA为模板吗？？？测量蛋白的表达量不能只做westernblot？
再答： real-time PCR功能很多的，可以测溶解曲线，甚至左高分辨率溶解曲线，当然最常用的就是做mRNA表达了，要做定量mRNA表达当然要以mRNA为模板，否则还做个什么。当然，如果你就是想基因分型，那么模板是DNA就可以了。mRNA提取质量是做实验的关键，不要讲解了，realtime定量的基础就是CT值，初始载量不能如实反映试验，那么一定是假阳性或假阴性。做westernblot是非常必要的，但是不要忘记转录后调控，因此做出来mRNA表达升高，但是免疫印迹没变化也别感到奇怪。当然最终起决定作用的还是蛋白表达量，那必须是免疫印迹做的。