最近拿镍柱做实验,可纯化不到His-tag融合蛋白,

来源：学生作业帮编辑：搜搜考试网作业帮分类：生物作业时间：2024/07/10 09:52:39

首先找一种正常的标签蛋白进行一下纯化试验,如果能够纯化出来那就是你的蛋白的问题,可能是蛋白在表达的时候非正常折叠,标签被折叠在内部,没有在蛋白表面游离着,这样的话当然不会被镍柱捕获了.比较严重的情况就是包涵体的形成,是否形成包涵体你可以根据蛋白的性质反应或者是电泳检测一下离心后的细胞破碎液上清和沉淀中目的蛋白的分布情况.如果形成包涵体那你就需要先使蛋白质尽可能的溶解了,可以加入一些变性剂,比如尿素.当标签暴露出来之后就比较容易挂柱了.

最近拿镍柱做实验,可纯化不到His-tag融合蛋白, gst融合蛋白是什么?和His-tag融合蛋白有什么区别么? 大肠杆菌表达带有GST标签的X蛋白,免疫家兔获得该融合蛋白的多克隆抗体血清,设计实验纯化X蛋白特异性抗体融合蛋白 His标签问题怎么溶解EDTA我用镍柱纯化his融合蛋白后,要把镍柱重新挂柱.然后stripping buffer 需要50mM的ED 分子克隆第三版中,GST融合蛋白纯化方案中有不溶性蛋白的纯化方案,请问包涵体与不溶性蛋白如何区分? 带HIS蛋白用镍柱纯化后的保存问题亲和层析纯化GST融合蛋白,如何减低非特异性背景融合蛋白肽指纹图谱分析,该蛋白为带有his标签的多角体融合目的蛋白（his-多角体蛋白-目的蛋白）教各位大侠,在蛋白纯化时,MBP-目的蛋白融合蛋白在变性之后还能结合上MBP抗体的beads吗? 为什么用带HIS标签的镍柱纯化试剂盒纯化蛋白后包ELISA可以避免大肠杆菌的干扰 GST纯化蛋白目前我的融合蛋白是40多Kd,GST标签是26.44,14点多Kd的目的蛋白,用GST纯化效果会如何,用H