真核重组质粒构建需要pMD18T载体么?
来源:学生作业帮 编辑:搜搜考试网作业帮 分类:化学作业 时间:2024/08/06 01:15:31
真核重组质粒构建需要pMD18T载体么?
我现在构建真核重组质粒,是合成引物,pcr出目的片段,目的片段的双酶切胶回收、pEGFP-C1质粒的双酶切胶回收,T4连接酶连接,转化,送去测序.想问下这步骤对么?看到有些文章用到pMD18T载体,我需要用pMD18T载体么?pMD18T载体有什么作用?急等~
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你的构建策略很好,不需要用T载体.
再问: 为什么有的文章里面用到pMD18T这个载体呢?它是什么作用,我不太明白
再答: pMD18T是个T载体。如果PCR产物直接双酶切效果不好,可以先把PCR产物放到T载体里,然后再做酶切,转到你最终的载体里。
再问: 哦,可是转化后挑单菌落进行菌液pcr鉴定,条带不太亮但位置对,还需要什么别的方法鉴定么?
再答: 位置对就对了。不太亮无非是质粒浓度低,没有关系,只要达到测序要求浓度就行。
再问: 为什么有的文章里面用到pMD18T这个载体呢?它是什么作用,我不太明白
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再问: 哦,可是转化后挑单菌落进行菌液pcr鉴定,条带不太亮但位置对,还需要什么别的方法鉴定么?
再答: 位置对就对了。不太亮无非是质粒浓度低,没有关系,只要达到测序要求浓度就行。
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