聚丙烯凝胶银染之后不显色

来源：学生作业帮编辑：搜搜考试网作业帮分类：生物作业时间：2024/07/26 20:40:13

聚丙烯凝胶银染之后不显色
胶一点反应都没有,完全透明的!
1 取出电泳后的凝胶,放入染色盒中用蒸馏水洗涤两次.
2 将蒸馏水倒出,加入25%的乙醇变性3mins.
3 回收乙醇,用蒸馏水洗涤凝胶一次,加入1%的硝酸溶液固定约3mins,待溴酚蓝的蓝色大部分褪尽,停止固定.
4 回收硝酸溶液,用蒸馏水洗涤凝胶一次,加入0.2%硝酸银染色约30mins.
.5 回收硝酸银溶液,用蒸馏水洗涤凝胶两次,加入含甲醛（0.2%）3%的碳酸钠溶液显色.待凝胶上显出清晰的DNA带型时,适时倒掉碳酸钠溶液,加入10%的乙酸终止显色反应.
6 将乙酸倒掉,用蒸馏水清洗两次,放入凝胶成像系统的暗箱中,扫描成像.
不知道是不是碳酸钠过期导致的?

基本可以确定是你样品或试剂出问题了,不然不会一点颜色都没有,就算条带不清晰,至少加样槽里会有颜色出现.
提以下两个建议:
一:样品DNA浓度太低,或者电泳前就已经分解掉了.检查办法是,电泳前,用分光光度计测一下DNA含量,看是否符合电泳标准;
二:由于某种操作不当,加样时好好的,跑时DNA变性或分解成小片段,全跑胶外头了.我曾经有一次缓冲液没配好,电泳时温度超高,夹子夹的又紧,玻璃板都炸了.因此你还是要检查一下你电泳时有没有问题?尤其是缓冲液
最后郑重建议你检查一下所用的所有试剂,最简单办法就是统统换新的,一个一个找,麻烦的很.
另外,你要想确定是不是碳酸纳过期,可以把这个胶放EB里染色,看看有没条带~

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