搜搜考试网载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做双酶切吗?
来源：学生作业帮 编辑：搜搜考试网作业帮 分类：生物作业 时间：2024/08/19 02:24:40
载体上临近的两个酶切位点可以设计起来做双酶切吗?
cicelyzh(站内联系TA)要根据距离和哪种限制酶的情况而定.有些能切开,有些不行.jwucn(站内联系TA):hand:.帮您顶一个.:hand:zqxabc(站内联系TA)可以的,临近的两个酶切位点可以分步酶切,一个一个切,先切一个,然后不跑胶直接加Binding buffer过柱洗脱,回收产物再进行下一个酶切.因分步酶切有损耗,所以质粒的量可以增加以保证回收浓度joan198108(站内联系TA)尽量不要,临近位点可能导致一个酶的结合影响另一个酶的结合,还有就是有些酶需要的结合片段较长,分步酶切后也不一定能够实现山水88(站内联系TA)可以的话把序列放上来大家给你分析吧...山雨(站内联系TA)这样子不好,酶切的效果好需要一定长度是保护碱基,挨着的位点切不动,分步切的话,buffer不一样,效果也非常一般,建议在引物上加酶切位点,这样就不受载体的限制了.cory0931(站内联系TA)on yr re:
质粒的两个酶切位点,紧挨着的话,势必会影响双酶切效果,原因是：
内切酶结合时,一般都是需要微点周围有多余碱基,否则影响结合；
再者,酶切后的粘性末端不余怒重合；
若是连个酶切位点之间有几个碱基的间隔,比如说6个以上,一般是可以的；
至少,也得间隔4个碱基吧；
质粒的两个酶切位点,紧挨着的话,势必会影响双酶切效果,原因是：
内切酶结合时,一般都是需要微点周围有多余碱基,否则影响结合；
再者,酶切后的粘性末端不余怒重合；
若是连个酶切位点之间有几个碱基的间隔,比如说6个以上,一般是可以的；
至少,也得间隔4个碱基吧；