用革兰氏阳性菌做菌落PCR时,怎样处理菌体模板?
来源:学生作业帮 编辑:搜搜考试网作业帮 分类:生物作业 时间:2024/08/03 04:30:59
用革兰氏阳性菌做菌落PCR时,怎样处理菌体模板?
如题,本人刚刚开始做分子生物学方面的研究,因为大家都知道G+的胞壁比G-菌比如E.coli的要厚些,所以要在PCR之前要对模板进行一定的处理,但是怎样处理才好?我上次做的时候就挑去单菌落(猪链球菌2型)溶30微升水后用95°处理10min,然后取了5微升做模板加到PCR体系里去了,做完PCR跑胶检测的时候没有带,我觉得是我在处理模板的时候没处理好导致的,因为其他试剂都是刚买的,请各位有经验的指点一下我这个新手,步骤最好说的详细一些,
如题,本人刚刚开始做分子生物学方面的研究,因为大家都知道G+的胞壁比G-菌比如E.coli的要厚些,所以要在PCR之前要对模板进行一定的处理,但是怎样处理才好?我上次做的时候就挑去单菌落(猪链球菌2型)溶30微升水后用95°处理10min,然后取了5微升做模板加到PCR体系里去了,做完PCR跑胶检测的时候没有带,我觉得是我在处理模板的时候没处理好导致的,因为其他试剂都是刚买的,请各位有经验的指点一下我这个新手,步骤最好说的详细一些,
为什么不抽基因组?抽出来的模板你可以用好多次.煮沸法模板有效期短,提取的效率也很低下,干扰PCR的杂质也多.就像你PCR失败一样,不一定是模板中没有DNA,也可能是杂质干扰的结果.
如果样本只是一个菌,或者不是很多,建议少量提取基因组,这样的模板是不会有问题的.至少,包括我在内我所有见过的做过这个实验的人都没有失败过.
如果样本很多,非得要煮沸法的话你这样做:
不要用PCR仪95℃处理,用液体培养基离心获得菌体,除去培养基,无菌水悬浮,沸水浴30min,迅速-20℃冰冻,化冻后8000rpm离心以沉淀细胞碎片,取2μL上清作为PCR模板.
如果你非要用PCR仪处理,也行,37℃溶菌酶预处理30min.
如果我说的你都不想做,那么请把你的模板用量减少到2μL(我指的是对于50μLPCR体系来说),说不定是杂质太多导致你PCR失败.
如果样本只是一个菌,或者不是很多,建议少量提取基因组,这样的模板是不会有问题的.至少,包括我在内我所有见过的做过这个实验的人都没有失败过.
如果样本很多,非得要煮沸法的话你这样做:
不要用PCR仪95℃处理,用液体培养基离心获得菌体,除去培养基,无菌水悬浮,沸水浴30min,迅速-20℃冰冻,化冻后8000rpm离心以沉淀细胞碎片,取2μL上清作为PCR模板.
如果你非要用PCR仪处理,也行,37℃溶菌酶预处理30min.
如果我说的你都不想做,那么请把你的模板用量减少到2μL(我指的是对于50μLPCR体系来说),说不定是杂质太多导致你PCR失败.
用革兰氏阳性菌做菌落PCR时,怎样处理菌体模板?
什么是菌落pcr假阳性
革兰氏阳性菌PCR革兰氏阳性菌如何做菌落PCR?煮20 min后,还是不能P出目的条带.
菌株菌粉可以直接做菌落PCR么?
菌液直接PCR我的pcr体系是50微升的,预变性时间5分钟,模板7微升,我接种单菌落到增菌液,以往都是煮沸了制模板然后p
菌落PCR阳性,目的片段2300bp,假阴性可能性很小,但是我取菌涂板子后,竟然没长出来,
转化后挑取含有目的片段的单菌落摇菌扩增以后划盘子,几天后挑取部分菌落做PCR无带,不知是何原因?
菌落PCR有关问题?我们做了转化实验,将转化后的菌涂在含Kan抗性的平板上,为什么挑取能生长的菌落做PCR没有目的条带?
菌落pcr是否可以直接扩增基因组上的目的基因?单菌落需要特殊处理吗
我们现在准备做菌落pcr,可以问一下你pcr时需不需要加石蜡油这种东西?还是其他物质啊.
微生物检测中,做细菌霉菌检测时是否要做阳性菌的阳性对照
单菌落菌液PCR检测请问转化的单菌落如何用菌液PCR检测?